■ 基本信息

■ 質(zhì)粒屬性

■ 質(zhì)粒簡(jiǎn)介

載體pGRE-Luc可以用來(lái)檢測(cè)GRE信號(hào)通路活性。載體pGRE-Luc含有螢火蟲(chóng)來(lái)源的熒光 素酶基因。這個(gè)載體也包含多拷貝的GRE結(jié)合位點(diǎn)序列，并且該序列和一段 TATA-類似啟動(dòng)子（PTAL）融合在一起，PTAL源于單純皰疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）啟動(dòng)子。當(dāng)內(nèi)源性的GRE蛋白結(jié)合到GRE增強(qiáng)元件時(shí)，轉(zhuǎn)錄起始，報(bào)告基因開(kāi)始表達(dá)。 熒光素酶編碼序列后有一段 SV40 多聚腺苷酸信號(hào)以確保在真核細(xì)胞中能正確有效的轉(zhuǎn)錄。 在 GRE 結(jié)合位點(diǎn)的上游有一段合成的轉(zhuǎn)錄抑制區(qū)（TB），該區(qū)域由多聚腺苷酸信號(hào)與轉(zhuǎn)錄 終止位點(diǎn)組成，以減少轉(zhuǎn)錄背景。該載體骨架也包含了一個(gè)f1復(fù)制起始區(qū)域以便進(jìn)行單鏈 DNA 的復(fù)制，一個(gè)pUC復(fù)制起始位點(diǎn)以及一個(gè)氨芐抗性基因，便于進(jìn)行培養(yǎng)篩選。

載體pGRE-Luc用來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子GRE與GRE增強(qiáng)子的作用，提供了直接檢測(cè)這條通路活性的途徑。該載體可以和一個(gè)目的基因的表達(dá)載體共轉(zhuǎn)來(lái)觀察，其是否影響這條通路的活性。 熒光素酶是一種高敏感性的酶原性報(bào)告蛋白，適用于任何一種標(biāo)準(zhǔn)的熒光素酶檢測(cè)法，可以用來(lái)定量表達(dá)水平。pGRE-Luc載體可以用任何一種標(biāo)準(zhǔn)的方法轉(zhuǎn)染至哺乳動(dòng)物細(xì)胞。為了篩選穩(wěn)定克隆，轉(zhuǎn)染的載體通常含有抗性篩選基因如：neomycin，hygromycin或者puromycin。

合適的宿主系：DH5α 以及一些其他通用系。進(jìn)行單鏈DNA的合成宿主菌需要包含一個(gè) F’ episome，比如 JM109。 篩選標(biāo)記：質(zhì)粒為宿主E.coli提供了氨芐抗性（100ug/ml）E.coli 復(fù)制起始位點(diǎn)：pUC 拷貝數(shù)：~500不相容質(zhì)粒:pMB1/ColE1。

■ 質(zhì)粒圖譜

■ 質(zhì)粒序列

質(zhì)粒序列請(qǐng)下載：

測(cè)序所得的部分序列

       1 gaattgttca ggaccagggc gtatctcttc atagccttat gcagttgctc tccagcggtt

      61 ccatcttcca gcggatagaa tggcgccggg cctttcttta tgtttttggc gtcttccatg

     121 gtggctttac caacagtacc ggaatgccaa gcttctgctt catccccgtg gcccgttgct

     181 cgcgtttgct ggcggtgtcc ccggaagaaa tatatttgca tgtctttagt tctatgatga

     241 cacaaacccc gcccagcgtc ttgtcattgg cgaattcgaa cacgcagatg cagtcggggc

     301 ggcagatcta gaacaaaatg taccggtaca ttttgttcta gaacaaaatg taccgctagc

     361 acgcgtaaga gctcggtacc tatcgataga gaaatgttct ggcacctgca cttgcactgg

     421 ggacagccta ttttgctagt ttgttttgtt tcgttttgtt ttgatggaga gcgtatgtta

     481 gtactatcga ttcacacaaa aaaccaacac acagatgtaa tgaaaataaa gatattttat

     541 tgcggccgct ccaagtacct cccgtacctt aatattactt acttatcatg gtagcttggg

     601 ctggcgtaat agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa

     661 tggcgaatgg caaattgtaa gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta

     721 aatcagctca ttttttaacc aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga

     781 atagaccgag atagggttga gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac tattaaagaa

     841 cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga

     901 accatcaccc taatcaagtt ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atc